Proceso para la realizar la técnica PCR (Ensayo Narrativo Original)

Proceso para la realizar la técnica PCR


La PCR, o Reacción en Cadena de Polimerasa, es una técnica biomolecular que nos permite identificar cualquier dato de nuestro código genético a través de la amplificación selectiva de fragmentos de ADN. Su importancia para el avance de la tecnología genética fue de gran magnitud que le otorgó a su creador, Dr Kary Mullis, el Premio Nobel de Química en 1993. Para su realización se necesita: la muestra de ADN a investigar (ADN molde); buffer, cloruro de magnesio, DNTPs, un par de cebadores o primers mínimo, Taq Polimerasa y agua. Además todo esto se realizará de un laboratorio, la mezcla dentro en un tubo Eppendorf y la máquina a utilizarse será el termociclador. EL proceso de la PCR consiste en tres pasos básicos, que describiremos a continuación.


El primer paso es la desnaturalización, que consiste en separar las dos hebras de las cuales está constituido el ADN molde. Este paso se puede realizar de distintos modos, el más usado es exponer el ADN a temperaturas de 95 ºC, aproximadamente. La temperatura a exponerse dependerá del largo de las hebras y del contenido de guanina y citosina, por ser su unión más fuerte y resistente a la desnaturalización. Otros métodos que menciona Passarge, raramente usados, son la adición sales o agentes químicos. (Passarge, 2010, pág. 62) Como resultado de este paso obtenemos dos hebras de ADN con nucleótidos expuestos.


A continuación tendremos la hibridación de los primers, que son pequeñas secuencias de nucleótidos diseñados para buscar un fragamento de ADN específico. (Dra. Celia E. Coto, 2003) En este caso el primer se unirá al fragmento que queremos identificar o amplificar por complementariedad de bases. Esto se da a una temperatura de 60 ºC y durante 30 segundos, aproximadamente. La temperatura y duración dependerá del primer que se esté utilizando. Así obtenemos el límite de la región de la molécula que será amplificada.


Finalizamos con la polimerización de la cadena complementaria del ADN molde partiendo de los primers como soporte inicial. La Taq Polimerasa será la encargada de la síntesis de la nueva hebra de ADN complementario añadiendo DNTPs, que son nucleótidos sueltos. (Jean-Pierre Herveg, 2006) La temperatura para la Taq Polimerasa es de 72 ºC aproximadamente y el tiempo dependerá del primer nuevamente. Podremos obtener cuatro hebras de ADN, dos hebras del ADN molde y otras dos clonadas.


Para ver nuestros resultados se debe realizar un gel de electroforesis y así identificar si lo que buscábamos se encontraba en el ADN de la muestra y también podremos saber en qué proporción. Lo cómodo de este método es que se puede obtener la amplificación o determinación del fragmento deseado, incluso realizando 20 veces estos simples pasos. Es así que por su alto rango de sensibilidad y por ser tan específico, se ha vuelto el mejor método para identificar virus o bacterias causantes de una enfermedad, identificar personas o hacer investigación científica sobre el ADN amplificado.

























Imagen de Molecular Station (http://www.molecularstation.com/es/pcr/)



Bibliografía
Cooper, Geoffrey, La célula, Marbán, 2007
Passarge, Genética Texto y Atlas, Ed. Médica Panamericana, 2010
biology.uprm.edu/labs/genetica/pcr.ppt, 8 de diciembre de 2010
http://www.sumanasinc.com/webcontent/animations/content/pcr.html, 8 de diciembre de 2010
http://www.quimicaviva.qb.fcen.uba.ar/contratapa/aprendiendo/capitulo14.htm, 8 de diciembre de 2010
http://genemol.org/biomolespa/Enzimas/ADN-POL.html, 8 de diciembre de 2010
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Sobre Lourdes Sánchez

"La consulta de artículos ha sido de gran ayuda durante mis años de estudio, espero contribuir un poco a la siguiente generación de internautas."
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