DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE GOT Y GPT EN SUERO - Informe de laboratorio #10 Bioquímica I

Informe de laboratorio #10

DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD DE GOT Y GPT EN SUERO

Transaminasas

Las transaminasas GOT y GPT son enzimas ampliamente difundidas en el organismo con elevada concentración en corazón, hígado, músculo esquelético, riñón y eritrocitos. La actividad sérica en condiciones normales es baja o nula. Un daño o enfermedad en cualquiera de estos tejidos conduce a un aumento en los niveles séricos. Así, luego de un infarto de miocardio se produce en suero un marcado aumento de la actividad de GOT (abundante en músculo cardíaco).

En hepatitis virales y otras formas de enfermedad hepática que involucren necrosis tisular, predominará la actividad sérica de GPT (abundante en tejido hepático). Una elevada actividad de transaminasas puede detectarse también en traumas accidentales o quirúrgicos y en distrofias musculares o miositis. 

Materiales

• Baño maría a 37ºC

• Agua destilada

• Pipeta automática, de ul

• Pipeta de 1ml

• Muestra (sangre)

• Espectrofotómetro

• Tubos de ensayo

• Cubeta

• Matraz

Reactivos 

• Sustrato GOT: solución con 100 mM de l-aspartato y 2 mM de α-cetoglutarato en buffer fosfatos 100 mM, pH 7,4.

• Sustrato GPT: solución con 200 mM de dl-alanina y 2 mM de α-cetoglutarato en buffer fosfatos 100 mM, pH 7,4.

• Reactivo 2,4-DNFH: solución conteniendo 1 mmol de 2,4-dinitrofenilhidracina en ácido clorhídrico 1 mol/l.

• Diluyente para Enzimas concentrado: solución de hidróxido de sodio 4 mol/l. 

Procedimiento

1. Preparar el diluyente para enzimas en un litro de agua destilada.

2. Centrifugar la muestra de sangre a 3000 rpm por 5 minutos.

3. Calibrar el espectrofotómetro con agua destilada.

4. En dos tubos marcados B (Blanco) y D (Desconocido), colocar:

5. Mezclar por inversión y retirar del baño. 

6. Después de 2 minutos leer la densidad óptica en espectrofotómetro a 505 nm.

Valores de referencia

Se consideran valores normales de transaminasas (GOT y GPT) hasta 12 U/l. Si bien se han hallado individuos normales con valores hasta 18 U/l, los niveles de transaminasas que se encuentren entre 12 y 18 U/l deben considerarse sospechosos.

Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.

Resultados

• Blanco: 0,443 densidad óptica

• Desconocido: 0,514 densidad óptica

0,514 - 0,443 = 0,071
11 U/l